Protocolo de extraccion de DNA

PROTOCOLO MINI PREP
METODO ALCALINO
BIRNBOIM-DOLY.



Para cada grupo.

Se centrifugan 1,6 mL de cultivo de E.coli 5’ a 4ºC 10000 RPM.
Se descarta el sobrenadante.
(esta parte no la vamos a hacer, van a estar los pellets directamente)

Al pellet bacteriano se lo resuspende en 100 uL de solución de lisis c/lisozima. Se deja incubar 15’.

Se le agrega 200 uL de solución alcalina se mezcla bien y se deja incubar en hielo 5’.

Se agrega 150 uL de acetato de sodio 3 M pH:4,8/5,2. Se agita hasta aparición de un flóculo blacuzco, se coloca en hielo y se deja 30’.

Se centrifuga 15’ a 10000 RPM 4ºC.

En otro eppendorf rotulado se coloca 1 mL de EtOH absoluto en frio.
El sobrenadante de la centrifugación se mezcla con el alcohol y se deja 2’.

Se lleva a centrifugar 15’ a 10000 RPM 4ºC.

Se descarta el sobrenadante, y se lava el pellet con alcohol 70%.

Se deja secar a T. Amb. o en estufa de 37ºC.

Se resuspende con 50 uL de agua o TE pH:8.0.