jueves, 23 de diciembre de 2010
Regulación Genética en Procariontes
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/15regulacion.htm
https://ocw.unican.es/pluginfile.php/879/course/section/967/Tema%25208-Bloque%2520I-Regulacion%2520Genetica.pdf
miércoles, 17 de marzo de 2010
Protocolo preparación gel de agarosa
Protocolo preparación gel de agarosa.
Preparar cuba de electroforesis y cuna del gel.
A los extremos abiertos de la cuna cubrirlos con cinta de enmascarar 3M Rocket, cuidando de un trozo a lo largo de la cinta sobresalga de la base de la cuna (0,5 cm). Frotar la base y el costado de la cuna en contacto con la cinta para asegurar que toda la superficie este pegada.
Colocar el peine en la parte superior de la cuna.
Colocar la cuna así preparada dentro de la cuba.
Preparación de la agarosa.
Pesar agarosa suficiente para un volumen de 150 mL y una concentración de 0,8 %. (unos 1,2 g).
Colocar la agarosa en un erle de 250 mL, agregar los 150 mL de buffer de corrida 1X (TBE), marcar hasta donde llega el buffer.
Llevar al microondas y fundir la agarosa. Controlar el nivel de líquido, si está por debajo de la marca realizada, completar hasta allí con H2O demonizada.
Dejar enfriar. Agregar antes de volcar 75 uL de Bromuro de etidio, agitar suavemente para mezclar. A partir de aquí la manipulación del gel debe hacerse con guantes, ya que el BrEt es mutagénico.
Volcar dentro de la cuna y dejar gelificar.
Una vez gelificado, sacar con cuidado las cintas de los bordes.
Llenar la cuba con el buffer de corrida 1X, colocar allí la cuna con el gel, recién entonces con cuidado sacarle el peine.
Preparar cuba de electroforesis y cuna del gel.
A los extremos abiertos de la cuna cubrirlos con cinta de enmascarar 3M Rocket, cuidando de un trozo a lo largo de la cinta sobresalga de la base de la cuna (0,5 cm). Frotar la base y el costado de la cuna en contacto con la cinta para asegurar que toda la superficie este pegada.
Colocar el peine en la parte superior de la cuna.
Colocar la cuna así preparada dentro de la cuba.
Preparación de la agarosa.
Pesar agarosa suficiente para un volumen de 150 mL y una concentración de 0,8 %. (unos 1,2 g).
Colocar la agarosa en un erle de 250 mL, agregar los 150 mL de buffer de corrida 1X (TBE), marcar hasta donde llega el buffer.
Llevar al microondas y fundir la agarosa. Controlar el nivel de líquido, si está por debajo de la marca realizada, completar hasta allí con H2O demonizada.
Dejar enfriar. Agregar antes de volcar 75 uL de Bromuro de etidio, agitar suavemente para mezclar. A partir de aquí la manipulación del gel debe hacerse con guantes, ya que el BrEt es mutagénico.
Volcar dentro de la cuna y dejar gelificar.
Una vez gelificado, sacar con cuidado las cintas de los bordes.
Llenar la cuba con el buffer de corrida 1X, colocar allí la cuna con el gel, recién entonces con cuidado sacarle el peine.
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